隨著我國國民經(jīng)濟的迅猛發(fā)展，軍、警犬得到廣泛應用同時，肉用犬的飼養(yǎng)已經(jīng)形成規(guī)模，寵物犬進入百姓家庭，尤其是國內(nèi)外的名優(yōu)品種，如我國的藏獒、美國的哈士奇、可卡等等。為適應我國軍、警犬及生物醫(yī)學和提高寵物犬品質(zhì)的發(fā)展需要，我們已經(jīng)采用犬的人工授精技術，這對我國犬業(yè)的發(fā)展有著重要的意義。
犬的人工授精是一種先進的科學技術，具有很多優(yōu)越性，可以提高種公犬的利用率，使優(yōu)良公犬能充分發(fā)揮高產(chǎn)的遺傳性，可以減少公犬的飼養(yǎng)數(shù)量及降低種公犬的飼養(yǎng)費用，把人力、物力、財力放在優(yōu)良公犬的飼養(yǎng)上，以提高犬的品質(zhì)。選擇優(yōu)良的種公犬，進行采精，然后將精液輸入子宮內(nèi)，可以提高受胎率及產(chǎn)仔率。我們通過幾年來的試驗和推廣，使犬的人工授精技術得到推廣應用，受胎率達85%左右，與自然交配相似，取得成功，現(xiàn)將我們的在生產(chǎn)實踐中成功做法總結如下，供廣大同行和養(yǎng)犬基地參考。
采精
1 公犬的調(diào)教
犬是經(jīng)過人類長期的飼養(yǎng)馴化來的，生理特點和公犬的品種性格的不同以及因個體不同，調(diào)教的效果也很不一致。有的公犬性欲較強，性格溫順，能很快適應人工采精，而有部分公犬膽怯、性欲差，則需較長時間耐心地調(diào)教。在調(diào)教過程中，要有耐心，切勿粗暴地對待，否則種公犬形成恐懼心理，更加劇了調(diào)教的困難，甚至造成人、犬的傷害。開始調(diào)教時，應選擇發(fā)情旺盛、性情溫馴、與公犬體格相適應的發(fā)情母犬作為“臺犬”。待公犬爬上臺犬后，操作人員按摩其睪丸及陰莖，使陰莖勃起，這樣經(jīng)數(shù)次調(diào)教即能適應人工采精操作。待種公犬習慣于人工采精，并建立了條件反射后，不再以母犬作臺犬?？芍苯舆M行采精。
2 場地的準備
為了保證公犬有一個良好的性欲反射條件，必須選好采精的場地。采精場應寬敞、安靜、清潔，并要徹底消毒，最好是公犬熟悉的環(huán)境，減少公犬的恐懼心理。
3 臺犬的準備
目前我們多采用發(fā)情的母犬作為臺犬。發(fā)情母犬的氣味可以提高公犬的性欲，刺激公犬的射精。采精前臺犬的后軀、尾根部、外陰部、肛門部位，都應徹底洗滌清潔，再用消毒過的干抹布擦干。
4 采精
4.1 采精方法
通常有兩種方法即手握法和假陰道采精法。我們多采用前者，操作人員手戴—上乳膠手套，輕緩地抓住公犬陰莖輕緩地拉出包皮，握住陰莖球給予適當?shù)膲毫?，公犬的陰莖便會充分勃起。經(jīng)按摩1min左右即可射精。由于公犬為分段射精，在射精間隙更換集精容器，分段收集精液。犬的射精量為2ml～15ml，分作三部分排出。第一部分是由尿道球腺分泌的水樣粘液，無精子；第二部分來自睪丸，富含有精子，呈白色粘滑液體；最后部分是前列腺分泌物，容量較多，含有少量精子。在第二段射精后，公犬表現(xiàn)為抬起一只后腿企圖越過采精者的手臂，在自然交配過程中也會發(fā)生抬后腿現(xiàn)象，越過母犬背部將身體轉向相反方向。因此，用于人工授精的精液最好為第二段排出的精液。在收集精液時，要特別注意器具不能觸及龜頭，否則會造成射精停止。另外，采精手應在龜頭的背部必須保持一定的壓力。采到的精液要立即用等溫的稀釋液1∶1 稀釋，并馬上鏡檢，根據(jù)鮮精的活力和密度決定稀釋倍數(shù)。
4.2 采精頻度
采精頻度對于公犬的性欲、采精量及精液品質(zhì)均有較大的影響。如果在24h內(nèi)采精3次，精子濃度即會降低、精子存活時間明顯縮短。連續(xù)5天每日采精2次，畸形精子數(shù)會大大增加。因此公犬適宜的采精頻度應該是1周采精2～3次。
精液的品質(zhì)檢查
1 精液量
大型品種的犬，射精量可30ml以上，而小型品種射精量僅有幾毫升。 種公犬的射精量，因其個體、年齡、采精方法、采精頻率和營養(yǎng)狀況等多種因素影響。射精量太多，可能是由于過多的副性腺泌物或其他異物混入，若過少可能是由于采精方法不當或生殖官功能衰退所致。發(fā)現(xiàn)這種情況就應該改進采精技術和方法，改進種公犬飼養(yǎng)管理或調(diào)整采精頻率。由于我們在臨床一線工作，因此所接觸的犬出現(xiàn)這些問題，都是在人工授精前期，首先對種公犬進行調(diào)教采精，進行精液品質(zhì)的檢查，給與技術指導，將受精過程可能出現(xiàn)的問題，盡量在進行人工授精前解決。
2 精液色澤
正常犬精液呈灰白色，其色澤深淺取決于精液中混合的白細胞及其他細胞的含量。若精液呈淡綠色是混有濃液，呈淡紅色是其中混有血液，呈黃色是混有尿液，凡屬上述顏色的異常精液，應該丟棄或停止采精，并找到病因，對相應的疾病進行治療。
3 精子活率
是指精液中有直線前進運動的精子百分率，是評定精液品質(zhì)優(yōu)劣的重要指標之一，也稱精子活力。檢查方法是在載玻片上放1滴精液，用蓋玻片壓上，制成壓片置于400倍的顯微鏡下觀察。精子活率一般采用10級評分，即按精子直線前進運動的百分比評為10個等級： 100％前進者為1.0分，90%前進的為0.9分，以下類推。
4 精子密度
是指精液的單位容積（1ml）內(nèi)所含精子數(shù)目，是評定精液品質(zhì)的一項重要指標，也稱精子濃度。我們多采用血細胞計算器計算法。
用血細胞計算器，在顯微鏡下計數(shù)，即將精液稀釋成200倍時，則用血紅細胞吸管稀釋。稀釋液用 3％的氯化鈉溶液，以殺死精子便于計算，其計數(shù)方法與血細胞計數(shù)相同。
5 精子的畸形率
是指形狀不正常的精子。精液中的畸形精子的比率越高，受孕率就越低。根據(jù)經(jīng)驗，犬精子畸形率不得超過10%～15%?；尉臃N類很多，如頭部巨大、瘦小、細長、圓形、皺縮、缺損、雙頭等，頸部膨大、雙體、纖細、屈折等，回旋、短小、長大、雙尾等。
6 pH 值的側定
測定的方法是用萬能試紙比色來測定，犬的精液ph值平均為6.4（6.1～7.0），pH值的高低與副性腺分泌物有關，第一部分精液pH 值居中、第二部分精液的 pH值最低；第三部分精液的 pH值最高。pH值偏低的品質(zhì)較好，pH值偏高的精子活力、受精力都顯著降低。
精液的稀釋
精液稀釋的目的在于增加精液的容量，擴大配種頭數(shù)。在實際操作中參考同仁的方法常用稀釋液有以下三種：
1 奶粉稀釋液
奶粉 10～12g，放在三角燒杯內(nèi)，然后加入蒸餾水100ml，攪拌均勻后過濾，進行蒸煮消毒。
2 奶粉、卵黃稀釋液
取奶粉10g先用少量水調(diào)成糊狀，再加蒸餾水至100ml用紗布過濾，在水浴中加溫至95℃，待冷卻后加入卵黃10ml，青霉素10萬IU，鏈霉素10萬IU。
3 檸檬酸鈉稀釋液
檸檬酸鈉(含1分子水)11.85g，葡萄糖4g，純化水400ml，使用時加20%卵黃。
稀釋倍數(shù)，一般根據(jù)原精液的密度來決定，通常犬精液可稀釋l～3 倍。
輸精
1 母犬的準備
將發(fā)情母犬保定后，尾巴拉向一邊，將陰門及附近用溫肥皂水擦洗干凈，并用消毒液進行消毒，而后再用生理鹽水沖洗，之后擦干凈。
2 確定最佳配種時間
若能在母犬的排卵時間予以配種的話，則能收到最佳的妊娠效果。但遺憾的是到現(xiàn)在為止在臨床實踐中尚未找到一種非常可靠的確定母犬排卵時間的方法。不過用幾種方法進行綜合判定常能取得較好的效果。我們通過觀察母犬陰道黏膜的顏色的變化和陰道細胞學檢查法，間接確定母犬排卵時間。
2.1 母犬陰道黏膜的顏色的變化
雌激素的增多是以下變化的主要原因。如陰道黏膜的水腫、增生及角質(zhì)化等。在間情期陰道黏膜上皮只有2～3層，故黏膜上血管明顯，呈玫瑰紅。而在發(fā)情期，由于雌激素的作用，陰道黏膜上皮達到15～20層，故陰道黏膜顏色變白及形成特有的浮冰樣堆積。用徹底消毒的開膣器進行陰道內(nèi)檢查，起初開膣器的方向朝上，然后水平向前推。達到一定深度后，在專用光源的幫助下，觀察陰道黏膜顏色及分泌物等。如陰道黏膜顏色蒼白，黏膜腫脹程度適中，用手觸及外陰根部，變軟而不是腫脹的較硬，分泌物增多者多為進入排卵期。
2.2 陰道細胞學檢查
陰道細胞學檢查可在做陰道檢查的同時用無菌的棉拭子在陰道深處輕輕擦拭一下以采得陰道黏膜上皮(陰道前庭處的陰道黏膜上皮受雌激素的影響不大，故要在陰道深處采樣)，然后在載玻片上輕輕的滾一下。用帕帕尼科方法，亦可用姬姆薩方法染色、陰道細胞染色的判定標準主要是根據(jù)細胞的大小、形狀、細胞核與細胞漿成分的比例及核內(nèi)物質(zhì)的存在與否。
在發(fā)情前期向發(fā)情過渡時，淺層細胞增多，且逐漸的角質(zhì)化。在接近排卵時看到的幾乎都是角質(zhì)化的表層細胞(80％～90％)，這些細胞單個的平位于載玻片上，猶如碎玻璃片。實踐證明，大約75～80％的母犬在最大角質(zhì)化程度后的第1天發(fā)生排卵。
3 輸精管的準備
犬的輸精管可用尼龍軟管、玻璃細管等自制的輸精管，使用前高壓滅菌徹底消毒，防止人為造成細菌感染。
4 精液的準備
由于凍精在母犬生殖道內(nèi)的存活時間縮短，活力較弱，受胎率較低，因此，我們采取的新鮮精液，在水浴鍋中保持35℃左右，用顯微鏡鏡進行品質(zhì)檢查后用稀釋液后稀釋，然后進行輸精。
5 輸精方法
母犬的陰道向后下方傾，與脊柱呈45°，在人工輸精時要注意這一生理特點。 將母犬站立保定，使輸精管沿著背線方向緩慢地旋轉插入陰道7～10cm深，于子宮頸口的位置，慢慢注入精液，輸完精后，母犬的后軀抬高片刻，而且用右手按摩幾分鐘陰道口外部，刺激母犬子宮收縮，便于子宮內(nèi)精子的運行，以防止精液流出。隔日進行第2次輸精。犬的一次輸精量為3～5 ml ，內(nèi)含有效精子數(shù)1億左右。
討論與小結
1 具有很高的經(jīng)濟效益
犬人工輸精節(jié)省種公犬，降低飼養(yǎng)成本。經(jīng)試驗用本交配種，公母比例為1∶5，用人工輸精公母比例為1∶80～100，可提高16倍。而我們在門診，接觸的大部分為寵物犬，且多為家里只有一條母犬，缺乏優(yōu)良的種公犬。因此，更加提高了種公犬的利用率，在今后的發(fā)展應該向凍精授精發(fā)展，但目前首要解決的就是提高凍精授精的受胎率技術。
2 提高人工授精的受胎率，種公犬飼養(yǎng)管理條件要求較高，必須喂給全價飼料，做好疾病的預防和良好的衛(wèi)生條件，才能保證種公犬健康和取得良好的精液品質(zhì)。
3 在犬的自然交配過程中，犬的陰莖海綿體充塞陰道，公犬陰莖根部的球狀海綿體膨大，使公母犬尾對尾地“鎖結”在一起。每次交配一般持續(xù)10～20分鐘，使射出精液流向子宮頸進入子宮，避免精液倒流。在人工授精中我們提高后軀，用手堵住陰道口外部，按摩幾分鐘，就是起到使精子充分的進入子宮角的作用。
4 在人工輸精過程中，應嚴格按照操作規(guī)程做好采精、精液品質(zhì)的檢查、精液的稀釋和輸精每個環(huán)節(jié)，才能獲得較好的效果，提高受胎率。